（三）、烧灼接种环，杀灭环上残留菌液，待冷却（是否冷却，可先在培养基边缘处试触，若琼脂溶化，表示未凉，稍等再试），从第一区域划线的末端开始往第二区内划线，重复以上操作，在第三四五区内划线，注意不要将最后一区的划线与第一区相连．

C、划线时要避免最后一区的划线与第一区线连．因为最后一区是细菌最稀少的，而第一区是细菌最致密的，如果连在一起则有可能影响单个菌落的分离效果，C正确；

本题的知识点是平板划线操作划线前后的灭菌及目的，平板划线法接种的结果预期，主要考查学生对平板划线法的掌握程度．

（二）、左手斜持琼脂平板，皿盖打开一条缝，右手于火焰近处将接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖，接种环不应划破培养基表面．

B、为防止水蒸气凝集滴入培养基造成干扰或污染，应将平板倒过来放置培养，B正确；

n日指数均线微生物接种方法很多，平板划线法是最常用的一种．图是平板划线示意图，划线的顺序为①②③④．下列操作方法正确的是（）

（一）、经火焰灭菌，待凉后，在火焰旁打开盛有菌液的试管棉塞，并将试管口过火焰，将以冷却的接种环伸入菌液，沾取一环菌液，将试管口过火焰丙塞上棉塞．